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  • 扶芳藤对兔心肌缺血再灌注损伤血清SOD MDA的影响

    日期:2012-12-27 14:37

    扶芳藤对兔心肌缺血再灌注损伤血清SOD、MDA的影响

    李成林 王庆高 广西中医学院第一附属医院

    530022 南宁市东葛路89-9号

    崔胜利 广西中医学院

    2008级硕士研究生 530001

    摘 要 目的:观察扶芳藤对兔心肌缺血再灌注损伤自由基的影响。 方法:将48只健康家兔随机分为假手术组(A组)、缺血再灌注模型组(B组)、卡托普利对照组(C组)、扶芳藤大剂量组(3.6 g/kg)(D组)、扶芳藤中剂量组(1.8 g/kg)(E组)、扶芳藤小剂量组(0.9 g/kg)(F组),每组8只。 采用黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,用硫代巴比妥酸法测丙二醛(MDA)含量。

    结果:模型组在缺血30 min及再灌注后SOD的活性显著降低,MDA含量明显增加,与假手术组比较有显著性差异(P<0.01);与模型组比较,用药各组在相应时段均有明显降低MDA含量及提高SOD活力的作用(P<0.01);其中扶芳藤大剂量作用优于卡托普利组(P<0.01或P<0.05),中剂量组与卡托普利作用相当(P>0.05)。

    结论:扶芳藤通过清除氧自由基,抑制了脂质体的氧化,从而对心肌缺血再灌注损伤起到了保护作用,尤其以扶芳藤大剂量组表现更为明显。

    关键词 扶芳藤;心肌缺血再灌注损伤;超氧化物歧化酶(SOD);丙二醛(MDA)

    扶芳藤Evonymus fortunei E-and.-mazz.为卫矛科植物扶芳藤的茎叶,具有舒筋活络、止血瘀的功效[1]。近年来有研究指出,扶芳藤有较强的抗氧化作用,具有防治脑缺血相关疾病的作用[2],对心血管有良好的药理作用[3]。临床上其复方制剂复方扶芳藤合剂(原名百年乐)作为防治老年心血管疾病的辅助治疗药物已被广泛应用。

    本课题之前已报道了扶芳藤通过减少Bax蛋白的表达,升高Bcl-2,抑制再灌注心肌细胞凋亡,从而对心肌缺血再灌注损伤(I/R)起到保护作用[4]。本实验进一步观察了扶芳藤对家兔心肌缺血再灌注模型血清中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)等指标的影响,从另一角度探讨其对心肌缺血再灌注损伤保护作用的机制,现报道如下。

    1 材料与仪器

    1.1 扶芳藤水煎液的制备

    扶芳藤干燥茎叶由广西中医学院制药厂提供,并经该厂质检科鉴定。取扶芳藤2 kg切碎,加入适量蒸馏水,煎煮2次,第一次煎煮2 h,第二次煎煮1 h,将2次煎煮的药液合并在一起,过滤(200目筛网)后浓缩至200 ml,制成含生药10 g/ml的药液。

    1.2 药品

    卡托普利,由江苏常州制药厂生产,批准文号:国药准字H32023731。

    1.3试剂仪器

    SOD及MDA试剂盒(购自南京建成生物工程研究所);TU 1901紫外分光光度计上海棱普仪器仪表有限公司);SSW-420-2S电热恒温水浴箱(上海博迅实业有限公司);PRO200组织匀浆器(美国);泰盟科技BL-410生物机能实验系统;泰盟科技HX-300S动

    物呼吸机;北京医用离心机制造LDZ4-0.8自动平衡微型离心机。

    1.4 动物

    新西兰大白兔,雌雄不限,雌无孕,体重2.5~3 kg,由广西医科大学动物实验中心提供。

    2 实验方法

    2.1 动物分组与给药

    实验动物按查随机数字表法随机分为A、B、C、D、E、F6组,每组8只。A为假手术组,B为模型组,C为卡托普利对照组(10 mg/kg),D为扶芳藤大剂量组(3.6 g/kg),E为扶芳中剂量组(1.8 g/kg),F为扶芳藤小剂量组(0.9 g/kg)。分笼饲养,自由饮食,于每天早上点灌胃给药,假手术组和模型组予蒸馏水灌胃。剂量是根据成人每日临床用量按人与动物之

    间药物剂量换算而成[5]。给药7 d,末次给药1 h后进行实验。

    2.2 心肌缺血再灌注损伤模型的制备[6]

    予20%乌拉坦5 ml/kg经耳缘静脉注射麻醉后,背位固定,气管切开,连接微型人工呼吸机(潮气量21 ml,频率30~40次/分)。沿胸骨左缘第2~4肋间开胸,暴露心脏,剪开心包膜,用小棉球将心脏向右边轻推,在左心耳与肺动脉圆锥之间找到与左冠状动脉伴行的心大静脉,用止血钳轻轻提起左心耳,于左心耳下方用医用眼科针,3/0号丝线穿线,将一细小医用硅胶管(直径约2 mm) 垫于血管与结扎线之间,连同心大静脉一起结扎冠状动脉左前降支,深度约2 mm,尽量减少对心肌的创伤。结扎40 min后剪线松开行再灌注40 min。以结扎后心电图ST段弓背样抬高>0.1 mV以上,同时左室前壁紫绀作为判定缺血成功的

    标准;松开结扎线后20 min内ST段下降>1/2幅度,左室前壁缺血区紫绀消失作为再灌注成功的标准。假手术组只穿线不结扎,余操作同上。

    2.3 血清中SOD,MDA的检测

    分别于缺血前、缺血后30 min、再灌注后30 min、再灌注后120 min自兔颈总动脉采血4 ml,各时点血液1500 rpm离心10 min,分离血清。采用黄嘌呤氧化酶法测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,用硫代巴比妥酸法测丙二醛(MDA)含量,操作按照试剂盒说明书进行。

    2.4统计学处理

    计量资料用均数±标准差(x±s)表示,多组间比较用方差分析,组间比较用q检验。全

    部数据采用SPSS12.0统计软件分析。

    3 实验结果

    3.1 各组血清 SOD 活性的测定

    由表1可以看出:缺血前各组实验动物血清SOD活力没有显著性差异(P>0.05)。假手术对照组血清SOD活性在实验过程中的变化无明显统计学意义(P>0.05)。模型组血清SOD活性于缺血30 min出现明显下降,与假手术对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);再灌注发生后,再灌注30min、再灌注120min两个时段血清SOD活性与缺血30min时相比均降低,其中以缺血再灌注120 min时降低最为明显,表明再灌注进一步降低了血清SOD活性。与模型组比较,3个时间观测点各用药组的血清SOD活性均明显升高(P<0.01)。与卡托普利对照组比较,扶芳藤大剂量组在3个时间观测点均能明显升高血清SOD的活性(P<0.01);中剂量组血清SOD活性与卡托普利组比较,无显著性差异(P>0.05)。

    3.2各组血清MDA含量的测定

    由表2可以看出:缺血前各组实验动物血清MDA含量没有显著性差异(P>0.05);假手术组血清MDA的含量在实验过程中变化不明显;模型组血清MDA含量于缺血30 min出现明显升高(P<0.01);再灌注发生后MDA含量逐渐升高,其中以缺血再灌注120 min时升高最为明显,说明再灌注进一步升高了血清中MDA的含量。与模型组比较,在3个时间观测点各用药组血清MDA含量均明显降低(P<0.01)。与卡托普利对照组比较,扶芳藤大剂量组在3个时间观测点的血清MDA含量均显著下降(P<0.05或P<0.01);中剂量组血清MDA含量与卡托普利组比较,无显著性差异(P>0.05)。

    4 讨 论

    扶芳藤入药首载于《本草拾遗》“扶芳藤,味苦,小温,无毒,主一切血,一切气,一切冷,去百病,久服延年,变白,不老……大主风血”,可用于治疗风湿痹痛、腰肌劳损、吐血、血崩、创伤出血、月经不调、血瘀闭经、跌打骨折等症,主要以茎叶入药,全年可采,属广西民间草药。

    前期研究结果表明,扶芳藤具有良好的心血管药理作用,可延长小鼠心肌缺血的存活时间,抑制血栓形成,改善去甲肾上腺素(NA) 所致的肠系膜微循环障碍,并可扩张氧耳廓微血管[3],具有扩张血管平滑肌和降血压作用[7]。心肌缺血再灌注损伤的机制普遍认为与心肌的能量代谢障碍、氧自由基的大量产生、细胞内钙离子的超载、血管内皮细胞分泌的一系列内皮因子等因素有关。氧自由基的大量产生使心肌组织的脂质体(LPO)增多,心肌组织丙二醛(MDA)的含量增加,从而引起心肌细胞膜结构的改变,心肌细胞受到损伤。因此,MDA是反映心肌氧自由基损伤的直接指标,而SOD是清除氧自由基的重要酶类,可减轻氧自由基对心肌细胞的损伤作用。

    本研究结果显示,心肌缺血30 min后模型组实验动物血清SOD活性较假手术组明显降低,MDA明显增高;随着再灌注的发生和发展,SOD活性较缺血期降低更显著,MDA进一步增高,说明缺血再灌注加剧了心肌的损伤。与模型组比较,C,D,E,F组在相应时段均有明显降低MDA含量及提高SOD活力的作用(P<0.01);其中扶芳藤大剂量作用优于卡托普利(P<0.01或P<0.05),而中剂量与卡托普利作用相当(P>0.05)。

    结果表明,扶芳藤可通过提高SOD的活性,降低氧自由基的产生,抑制了脂质体的过氧化,从而对心肌缺血再灌注损伤起到了保护作用,此作用以扶芳藤大剂量组最为明显。

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